Johnny Test'te, Johnny genetik mühendisliği ürünü köpeği Dukey ile birlikte sürekli yeni maceralara atılır. Evde ise Susan ve Mary, laboratuvarlarında durmadan deney yapar ve Johnny'nin başına yeni işler açar. Bir gün yaptıkları bir buluş işe yarar, ertesi gün ortalığı karıştırır. Johnny, bu garip düzenin içinde kendini beklenmedik sorunların ortasında bulur. Dukey bazen ona yardım eder, bazen de işleri daha da zorlaştırır. Johnny, çıkan her yeni probleme hızlıca çözüm arar ve kardeşlerinin deneylerinden kurtulmaya çalışır. Her macerada peş peşe komik ve aksiyon dolu anlar yaşanır.